Antonino Mastruzzo si è formato in discipline storiche presso la Scuola Normale Superiore di Pisa. È attualmente professore associato di Paleografia Latina presso l'Università degli Studi di Pisa, titolare degli insegnamenti di paleografia latina e di diplomatica.Ha collaborato e collabora ad attività seminariali e di ricerca promosse da varie Università italiane. Dirige ledizione delle Lettere originali del medioevo latino, presso la Scuola Normale Superiore di Pisa. È membro del comitato di redazione della rivista Scrineum.